パンデミック前にSARS-CoV-2 🦠 が流行していたの？

SMILE試験: Screening and Multiple Intervention on Lung Epidemics; ClinicalTrials.gov Identifier: NCT03654105
SMILE試験（肺疫病のスクリーニングと多重介入）は、生涯喫煙者における年1回の超低用量CTによる早期診断の有効性を検証する進行中の無作為化試験です。経口シチシンによる禁煙促進、低用量アセチルサリチル酸（ASA）、食事療法、身体活動量の増加による慢性炎症状態の軽減といった多重介入と組み合わせることで、喫煙継続率の改善と診断率の向上を図るものです。すべての被験者は、ベースラインの低用量CT、スパイロメトリー、一酸化炭素（CO）測定、血液サンプル採取、人体計測値および社会人口統計学的データ収集を受けた。本研究ではミラノ国立腫瘍研究所において登録された合計1114名のボランティアのうち2019年9月2日から2020年2月27日までの間にスクリーニングを受けた959名を対象とした

ELISAの方法：ヒト抗SARS-CoV-2 Spike（S1）IgM抗体CR3022（Native Antigen、英国オックスフォード）および抗Spike RBD（SARS-CoV-2/COVID-19）ヒトモノクローナル抗体（eEnzyme、米国メリーランド州ゲイサーズバーグ）をELISAの陽性対照として使用した
手順 は J Immunol Methods.2021 Feb:489:112937.

対象：2019年10月から2020年2月の間に北イタリアの3つの都市と地域（ミラノ／ロンバルディア、トリノ／ピエモンテ、ボローニャ／エミリア・ロマーニャ）にある5つの廃水処理場（WWTP）から採取された40の複合流入廃水サンプルが分析された。2018年9月12日から2019年6月19日の間に、ミラノ、トリノ、ボローニャの同じ下水処理場から採取された他の24の排水サンプルも「ブランク」サンプルとして分析された
方法：ネステッドRT-PCR法とリアルタイムRT-PCR法
結果：ネステッドRT-PCRにより、下水サンプル中のSARS-CoV-2 RNAは3.71 g.c./μLの濃度で検出された。標的RNAのみのサンプルでは、​​リアルタイムRT-(q)PCRによりLOD50は0.41 g.c./μL、LOQは3.71 g.c./μLだった。下水サンプルでは、​​LOD50は1.46 g.c./μL RNA、LOQは7.35 g.c./μLだった。全体として、リアルタイムRT-(q)PCRの結果、標準曲線の傾きは-3.32～-3.47、相関係数R2は0.996～1.000の範囲。2つのアッセイの特異性に関しては、SARS-CoV-2 RNA（EVAgコロナウイルスパネル）を含む反応でのみ増幅が認められ、他のヒトコロナウイルス、腸管ウイルスおよび細菌のRNA/DNAパネル、そして2018年9月から2019年6月の間に採取された24個の「ブランク」下水サンプルでは非特異的な増幅は検出されなかった。濃縮・抽出手順の回収効率は、アルファコロナウイルスHCoV-229E（ATCC VR-740）を用いて4連で実施したシード実験で評価され、平均回収率は2.04 ± 0.70%で、リアルタイムRT-(q)PCRで評価したサンプル阻害は、ゼロから49.0%の範囲で、中央値は3.2%です。2019年10月から2020年2月の間にミラノ、トリノ、ボローニャの下水処理場から採取された40検体の下水サンプルについて、ネストRT-PCRでは40検体中18検体（45%）（アンプリコン配列はブラスト分析によりSARS-CoV-2と確認）で、新たに開発されたリアルタイムRT-(q)PCRでは40検体中26検体（65%）でSARS-CoV-2 RNAが検出された（表2）。2つの検査法の全体的な一致率は65.0%（40検体中26検体のペア結果）
15検体では、両方の方法でSARS-CoV-2 RNAが検出された。ネストPCRとリアルタイムPCRの両方で陽性反応を示したこれらの検体のみを確定陽性検体とした。以前に公表されたSARS-CoV-2 RdRpおよびSarbeco E遺伝子検査プロトコルを用いた検査では、陽性反応を示した検体は1つもなかった。
出典：Sci. Total Environ. 2021;750 doi: 10.1016/j.scitotenv.2020.141711.